(一)1/15mol/L PBS(磷酸缓冲液Phosphate Buffer Solution,PBS)}h&Nw
甲液:1/15mol/L Na2HPO4溶液~]?{f`
Na2HPO4 9.465g:2J5
蒸馏水 加至1000ml\h)RK~
乙液:l/15mol/L KH2PO4溶液v
KH2P04 9.07g\
蒸馏水 加至1000m1ZgX
分装在棕色瓶内,于4℃冰箱中保存,用时甲、乙两液各按不同比例混合,即可得所需pH的缓冲液gNzd
(二)0.3%台盼兰染液W"={1J
称取台盼兰(Trypan blue)粉0.3克,溶于100ml生理盐水中,加热使之完全溶解,用滤纸过滤除渣,装入瓶内室温保存。;/*YNq
(三)0.5%酚红指示剂MI]sf
酚红 0.5g #yKx
0.1N(0.4%)NaOH 15mlELy&
双蒸水 85mlh_C4
将0.5克酚红置研钵中,缓漫滴加0.1NNaOH溶液边加边磨,并不断吸出已溶解的酚红液,直至全部溶解,然后加入85ml双蒸水,颜色为深红,经粗滤纸过滤后使用,室温保存。 ;e~U
(四)5.6%NaHCO3溶液HL9.u@
称NaHCO35.6克,溶于100ml蒸馏水中,室温保存即可(如需要也可10磅15分钟高压灭菌,4℃冰箱保存)[BS[VG
(五)10μg/ml秋水仙素dhvi
秋水仙素 lOmgIx
生理盐水 100mlk K)p+
装入茶色瓶中,为贮备液,4℃冰箱中保存。甩时取贮备液1ml加生理盐水9ml即可。rXCH
(六)0.4%KCl-0.4%柠檬酸钠低渗液/75spL
将0.4%KCl和0.4%柠檬酸钠两液等量混合即可,室温保存。U>K9
(七)2%柠檬酸钠.y
称取柠檬酸钠2克,加100ml双蒸水即可,室温保存。]@KO
(八)0.2%次甲基兰染液.z^{)
称次甲基兰(Methylene blue)0.2克,加蒸馏水100ml,室温保存。K{;rm3
(九)0.5%醋酸洋红(Aceio Carmine)染液/vk4 )
洋红 lgd^osrQ
醋酸 90ml:$
蒸馏水 110ml'
将90ml醋酸加入110ml蒸馏水煮沸,然后将火焰移去,立即加入1克洋红,使之迅速冷却过滤,加饱和氢氧化铁(媒染剂)水溶液数滴,直到呈葡萄酒色。室温保存。加铁使洋红沉淀于组织而着色。此染液室温存放时间越长效果越好,室温保存。I
(十)1%甲苯胺兰(Toluidine blue)t?R
称取甲苯胺兰1克,加蒸馏水lOOml。6{ix
(十一)1/3000中性红染液-4<
取中性红(Neutral red)0.1克,加蒸馏水300ml。室温保存。Zr
(十二)Giemsa染液NoH
1.贮备液,sba
Giemsa粉 1gvEXCDK
纯甘油 66ml L~Y[3A
甲醇 66mlj
先将Giemsa粉置于研钵中加少量甘油,充分研磨,呈无颗粒的糊状。再将全部甘油加入,放入56℃温箱中2小时,然后加入甲醇,保存于茶色瓶中。一般两周后使用为好。J}s3 J
2.工作液XU;9:
临用时将贮备液与pH6.8的磷酸缓冲液按照1:20混合。J:bJ
(十三)埃利希(Ehrlich)苏木精染液)m.
苏木精 1.0gv>ID;
乙醇 50mlVu$p8@
醋酸 5mlid
甘油 50mlH>d%Z,
硫酸铝钾 5gQ{!&Vo
蒸馏水 50mlz),,x@
将苏木精溶于少量的乙醇中,再加醋酸并搅拌,以加速其溶解。当苏木精溶解后将甘油加入并摇动容器,同时加入其余的乙醇;硫酸铝钾需研磨并加热,然后溶解于蒸馏水中,将其一滴滴地加入上边的溶液,并不断摇动,此液配好后,将瓶口用纱布盖好,置通风处,经常摇动以加速其成熟,成熟约需4周左右,成熟的染液为深红色。y/Z
二、细胞化学和细胞组分分离溶液U
(一)M一缓冲液 HEpS:(
眯唑(Imidazole) 3.404g#n["{
KCI 3.7gF-)
MgCl2•6H2O 101.65mg2fi]_W
ECTA 380.35mg3:C&
EDTA 29.224mgaCm_(
巯基乙醇 0.07ml \6^?+
甘油 297mlGoMRuG
蒸馏水 加至1000ml1by{W
用lNHCl调pH至7.2室温保存。E_|
(二)2%Triton X一100溶液p[Qa\!
量取2mlTriton X一100(聚乙二醇辛基苯基醚)液,加M缓冲液98ml即可。QNU?m
(三)0.2%考马斯亮兰R-250染液P
甲醇 46.5ml:
醋酸 7.0mlMtG43*
考马斯亮兰 0.2g`
蒸馏水 加至100mlqg
(四)A.0.1%碱性固绿染液(pH8.0~8.5)|{
1.0.1%固绿水溶液SZt<
固绿(Fast green) 0.1g\h|B>
蒸馏水 100mls?]9^?
2.0.05%Na2C03溶液ESx
Na2C03 50mgt-[
蒸馏水 100ml-
用时按1:1体积混合即可。/Kfw,/
B.0.1%酸性固绿染液(pH2.2)K+`r
1.0.1%固绿水溶液。C;{pEr
2.mol/L×75盐酸液-F/c
盐酸(比重1.19)0.109ml加蒸馏水至100ml!Ivx
用时按l:1混合。\
(五)甲基绿一哌咯宁染液idw/\r
1.1mol/L醋酸缓冲液(pH4.8):(1)醋酸 17ml 8J@XHW
蒸馏水 加至200ml0~9
(2)醋酸水 13.5gv#s
蒸馏水 加至lOOmlV1Lb
用时分别取两液40ml、60ml混匀即可。%CQO`6
2.甲基绿一哌咯宁(methyl green—Pyrcnln)NO}M
5%哌咯宁水溶液 6mlH~
2%甲基绿水溶液 6ml=M$W0
蒸馏水 16ml;c-
lmol/L醋酸缓冲液 16mlMY&lq
lmol/L醋酸缓冲液临用时才可加入染液中。MkU
(六)Schiff试剂}S
将碱性品红0.5克加入lOOml沸水,持续煮沸5分钟,并随时搅拌,待冷却到50℃时过滤到棕色瓶中,加1N HC11O毫升,冷却至25℃时加入1克NaHSO3,此时需很好的振荡,避光过夜。次日取出(呈淡黄色)加0.25克活性炭剧烈振荡1分钟。过滤后即得Schiff试剂。避光低温保存。Mlzp
(七)联苯胺混合液F#iw(
联苯胺(4.4 Diamino benzidine) 0.2gQ
95%乙醇 lOOml}j\
3%过氧化氢 2滴~o
此液临用时配制。w
(八)l%番红水溶液i
番红(Safranin) 1.0gC
蒸馏水 100ml,t,U*
(九)1%SDS(十二烷基硫酸钠Sodium dodecyl sulfate,SDS) dUyz
SDS 10g 3i9
45%乙醇 100ml5uQWeR
(十)1mol/LTris(三羟甲基氨基甲烷/盐酸缓冲液Trihydroxy methylaminomethane Tris/HCL)pH7.8c
Tris 12.114g[xrK
蒸馏水 lOOmlX[/An=
先将Tris溶于少量蒸馏水,用HCI调pH至7.8,然后加水至100ml[Xk;
(十一)Ringer Solution !74
氯化钠(冷血动物用0.65克) 0.9克Yi8
氯化钾 0.042克ca*`27
氯化钙 0.025克x>lkd.
蒸馏水 100mlfm
(十二)淀粉肉汤培养基gR^蛋白 2gC
淀粉 6gA,-Z
牛肉汤 100ml ?L
用10%NaHCO3调pH至7.0~7.2pU
(十三)0.25mol/L蔗糖一0.003mol/L氯化钙溶液Bu
蔗糖 85.5g`/D+{|
氯化钙 0.33gKlz&9r
蒸馏水 1000ml BV
(十四)1%詹纳斯绿B染液f' H(@
取詹纳斯绿(Janus green 1.0g Ringer氏液100ml#ss
(十五)1%刚果红染液b5s3