食品检测试剂配制 [复制链接]

(一)1/15mol/L PBS(磷酸缓冲液Phosphate Buffer Solution，PBS)}h&Nw
甲液：1/15mol/L Na2HPO4溶液~]?{f`
Na2HPO4 9.465g:2J5
蒸馏水 加至1000ml\h)RK~
乙液：l/15mol/L KH2PO4溶液v
KH2P04 9.07g\
蒸馏水 加至1000m1ZgX
分装在棕色瓶内，于4℃冰箱中保存，用时甲、乙两液各按不同比例混合，即可得所需pH的缓冲液gNzd
(二)0.3％台盼兰染液W"={1J
称取台盼兰(Trypan blue)粉0.3克，溶于100ml生理盐水中，加热使之完全溶解，用滤纸过滤除渣，装入瓶内室温保存。;/*YNq
(三)0.5％酚红指示剂MI]sf
酚红 0.5g #yKx
0.1N(0.4％)NaOH 15mlELy&
双蒸水 85mlh_C4
将0.5克酚红置研钵中，缓漫滴加0.1NNaOH溶液边加边磨，并不断吸出已溶解的酚红液，直至全部溶解，然后加入85ml双蒸水，颜色为深红，经粗滤纸过滤后使用，室温保存。 ;e~U
(四)5.6％NaHCO3溶液HL9.u@
称NaHCO35.6克，溶于100ml蒸馏水中，室温保存即可(如需要也可10磅15分钟高压灭菌，4℃冰箱保存)[BS[VG
(五)10μg／ml秋水仙素dhvi
秋水仙素 lOmgIx
生理盐水 100mlk K)p+
装入茶色瓶中，为贮备液，4℃冰箱中保存。甩时取贮备液1ml加生理盐水9ml即可。rXCH
(六)0.4％KCl-0.4％柠檬酸钠低渗液/75spL
将0.4％KCl和0.4％柠檬酸钠两液等量混合即可，室温保存。U>K9
(七)2％柠檬酸钠.y
称取柠檬酸钠2克，加100ml双蒸水即可，室温保存。]@KO
（八）0.2％次甲基兰染液.z^{)
称次甲基兰(Methylene blue)0.2克，加蒸馏水100ml，室温保存。K{;rm3
(九)0.5％醋酸洋红(Aceio Carmine)染液/vk4 )
洋红 lgd^osrQ
醋酸 90ml:$
蒸馏水 110ml'
将90ml醋酸加入110ml蒸馏水煮沸，然后将火焰移去，立即加入1克洋红，使之迅速冷却过滤，加饱和氢氧化铁(媒染剂)水溶液数滴，直到呈葡萄酒色。室温保存。加铁使洋红沉淀于组织而着色。此染液室温存放时间越长效果越好，室温保存。I
(十)1％甲苯胺兰(Toluidine blue)t?R
称取甲苯胺兰1克，加蒸馏水lOOml。6{ix
(十一)1/3000中性红染液-4<
取中性红(Neutral red)0.1克，加蒸馏水300ml。室温保存。Zr
(十二)Giemsa染液NoH
1．贮备液,sba
Giemsa粉 1gvEXCDK
纯甘油 66ml L~Y[3A
甲醇 66mlj
先将Giemsa粉置于研钵中加少量甘油，充分研磨，呈无颗粒的糊状。再将全部甘油加入，放入56℃温箱中2小时，然后加入甲醇，保存于茶色瓶中。一般两周后使用为好。J}s3 J
2．工作液XU;9:
临用时将贮备液与pH6.8的磷酸缓冲液按照1:20混合。J:bJ
(十三)埃利希(Ehrlich)苏木精染液)m.
苏木精 1.0gv>ID;
乙醇 50mlVu$p8@
醋酸 5mlid
甘油 50mlH>d%Z,
硫酸铝钾 5gQ{!&Vo
蒸馏水 50mlz),,x@
将苏木精溶于少量的乙醇中，再加醋酸并搅拌，以加速其溶解。当苏木精溶解后将甘油加入并摇动容器，同时加入其余的乙醇；硫酸铝钾需研磨并加热，然后溶解于蒸馏水中，将其一滴滴地加入上边的溶液，并不断摇动，此液配好后，将瓶口用纱布盖好，置通风处，经常摇动以加速其成熟，成熟约需4周左右，成熟的染液为深红色。y/Z
二、细胞化学和细胞组分分离溶液U
(一)M一缓冲液 HEpS:(
眯唑(Imidazole) 3.404g#n["{
KCI 3.7gF-)
MgCl2•6H2O 101.65mg2fi]_W
ECTA 380.35mg3:C&
EDTA 29.224mgaCm_(
巯基乙醇 0.07ml \6^?+
甘油 297mlGoMRuG
蒸馏水 加至1000ml1by{W
用lNHCl调pH至7.2室温保存。E_|
(二)2％Triton X一100溶液p[Qa\!
量取2mlTriton X一100(聚乙二醇辛基苯基醚)液，加M缓冲液98ml即可。QNU?m
（三）0.2％考马斯亮兰R-250染液P
甲醇 46.5ml:
醋酸 7.0mlMtG43*
考马斯亮兰 0.2g`
蒸馏水 加至100mlqg
(四)A．0.1％碱性固绿染液(pH8.0～8.5)|{
1．0.1％固绿水溶液SZt<
固绿(Fast green) 0.1g\h|B>
蒸馏水 100mls?]9^?
2．0.05％Na2C03溶液ESx
Na2C03 50mgt-[
蒸馏水 100ml-
用时按1:1体积混合即可。/Kfw,/
B．0.1％酸性固绿染液(pH2.2)K+`r
1．0.1％固绿水溶液。C;{pEr
2．mol／L×75盐酸液-F/c
盐酸(比重1.19)0.109ml加蒸馏水至100ml!Ivx
用时按l:1混合。\
(五)甲基绿一哌咯宁染液idw/\r
1.1mol／L醋酸缓冲液(pH4.8)：(1)醋酸 17ml 8J@XHW
蒸馏水 加至200ml0~9
(2)醋酸水 13.5gv#s
蒸馏水 加至lOOmlV1Lb
用时分别取两液40ml、60ml混匀即可。%CQO`6
2．甲基绿一哌咯宁(methyl green—Pyrcnln)NO}M
5％哌咯宁水溶液 6mlH~
2％甲基绿水溶液 6ml=M$W0
蒸馏水 16ml;c-
lmol/L醋酸缓冲液 16mlMY&lq
lmol/L醋酸缓冲液临用时才可加入染液中。MkU
(六)Schiff试剂}S
将碱性品红0.5克加入lOOml沸水，持续煮沸5分钟，并随时搅拌，待冷却到50℃时过滤到棕色瓶中，加1N HC11O毫升，冷却至25℃时加入1克NaHSO3，此时需很好的振荡，避光过夜。次日取出(呈淡黄色)加0.25克活性炭剧烈振荡1分钟。过滤后即得Schiff试剂。避光低温保存。Mlzp
(七)联苯胺混合液F#iw(
联苯胺(4.4 Diamino benzidine) 0.2gQ
95％乙醇 lOOml}j\
3％过氧化氢 2滴~o
此液临用时配制。w
(八)l％番红水溶液i
番红(Safranin) 1.0gC
蒸馏水 100ml,t,U*
(九)1％SDS(十二烷基硫酸钠Sodium dodecyl sulfate,SDS) dUyz
SDS 10g 3i9
45％乙醇 100ml5uQWeR
(十)1mol／LTris(三羟甲基氨基甲烷/盐酸缓冲液Trihydroxy methylaminomethane Tris/HCL)pH7.8c
Tris 12.114g[xrK
蒸馏水 lOOmlX[/An=
先将Tris溶于少量蒸馏水，用HCI调pH至7.8，然后加水至100ml[Xk;
(十一)Ringer Solution !74
氯化钠(冷血动物用0．65克) 0.9克Yi8
氯化钾 0.042克ca*`27
氯化钙 0.025克x>lkd.
蒸馏水 100mlfm
(十二)淀粉肉汤培养基gR^蛋白 2gC
淀粉 6gA,-Z
牛肉汤 100ml ?L
用10％NaHCO3调pH至7.0～7.2pU
(十三)0.25mol／L蔗糖一0.003mol／L氯化钙溶液Bu
蔗糖 85.5g`/D+{|
氯化钙 0.33gKlz&9r
蒸馏水 1000ml BV
(十四)1％詹纳斯绿B染液f' H(@
取詹纳斯绿(Janus green 1.0g Ringer氏液100ml#ss
(十五)1％刚果红染液b5s3

刚果红 1gyd2)bL
蒸馏水 100mlN[9Y
(十六)Gomori硝酸铅作用液-*
0.05mol／L醋酸缓冲液(pH5) lOOml(&
0.6醋酸加蒸馏水200ml、取其 42ml7X-
醋酸钠1.36g加蒸馏水200ml，取其158ml共200ml v-w+D
B-甘油磷酸钠 2g#
醋酸铅 2gpH!P
5％氯化镁 5ml[
以上作用液在临用时配制，最终在pH5～5.2，过滤使用。f|8
(王世藩 汇编)vQz+
三、细胞培养和细胞融合溶液E
(一)0.01mol／LPBS(磷酸盐缓冲液Phosphate Buffer Saline，PBS)pH7.2。C5ia/v
0.2mol／L磷酸氢二钠液(甲液)： !o8!(t
NaH2PO4•12H2O 35.814g>:X9=\
双蒸水 加至500ml$
0.2mol／L磷酸二氢钠液(乙液):++XQs;
NaH2PO4•12H2O 15.601gpZ)
双蒸水 加至500ml)?U
取甲液36ml，乙液14ml和NaCl8.2克，加双蒸水至1000ml。混匀待完全溶解分装，经高压灭菌后保存于4℃冰箱备用。]IRhBS
(二)50％PEG(聚乙二醇Polyethyleneglycol mwl500)|4}B<
称取0.5克PEG，用前放入试管中在酒精灯火焰上熔化，加入等量37℃予热的MEM培养液，混匀，保温在37℃水浴中待用。9K$
(三)MEM培养液(含10％小牛血清)Zi`
MEM培养液(日本制药株式会社) 9.4ggXKl!
双蒸水 1000mle
NaHCO3 1.5g0\*
谷氨酰胺(L-glutamin) 0.292gc@
56℃灭活30分钟的小牛血清110mlv3_M7Y
MEM粉末加水溶解后，用NaHCO3调pH到7.1(因在抽滤过程中pH升高0.2～0.3)，然后加灭活的小牛血清和谷氨酰胺，待完全溶解后，立即用G6抽滤除菌，分装，置4℃冰箱保存备用。^F`
(四)0.25％胰蛋白酶一0.02％EDTA混合消化液c l
胰蛋白酶(Trypsin)粉 0.25g;(@w
EDTA粉 20.0mgUJ]V`
0.01mol／L PBS 100ml[!J_!`
先用少量PBS溶解胰蛋白酶，然后将EDTA粉末和剩下的液体加入混合，置37℃水浴中1小时左右(待彻底溶解，液体呈透明为止)，用G5抽滤，分装置4℃冰箱中保存。t?,(五)Hanks液4
1．原液甲%\95=(
NaCl 160gyO#
KCl 8gZhE
MgSO4•7H2O 2g;0
MgCI2•6H2O 2gR\`a
溶于800ml馏水中。pGO~HP
CaCl2(无水) 2.8gYB
溶于100ml蒸馏水中。]5i8
将两种液体混合后，加水至1000ml用滤纸滤过，再加2ml氯仿防腐，置4℃冰箱备用。\
原液乙&ZW
Na2HPO4•12H2O 3.04g@I\K
KH2PO4 1.2g bma^w
葡萄糖 20.0gO`
溶于800ml蒸馏水中，用滤纸过滤，然后加0.5％酚红80ml，再加水至1000ml，最后加入2ml氯仿防腐，置4℃冰箱备用。ImWI6
2．使用液^zDO<
甲乙两液各1份，双蒸水18份，混匀分装包扎好瓶口，经10磅15分钟高压灭菌后置4℃冰箱中保存。使用时用5.6％NaHCO3调pH值到所需要求。TLx7a
(六)1640培养液(含lO％小牛血清),
RPMI-1640粉 10.39gb!
双蒸水 加至1000mli通入适量的C02气体，边通入CO2边慢慢搅拌，使其(呈透明)完全溶解。用NaHCO31.5克调pH值到7.2。^
双抗1万u/ml 10mls
灭活小牛血清 110mln&m-
混匀上述液体，立即用G6抽滤除菌分装，置4℃冰箱备用。=
(七)青、链霉素溶液GxmH
青霉素钠盐(40万u／瓶) 5瓶lFB"
链霉素(100万u／瓶) 2瓶RCV
将两者溶于200ml0.9％的无菌生理盐水，分装小瓶，-30℃保存。双抗在培养基中的终浓度为各lOOu为宜。{I'`c
(八)二甲基亚砜诱导HL-60细胞分化使用的终浓度为1。4％。e9
(九)BrdU溶液(200ug/m1)g"{
用无菌青霉素瓶，在室温下称取1.0mg，在无菌条件下加入灭菌生理盐水9.0ml，溶解，混匀，用黑纸包严，避光置冰箱冰格中保存。最好用时现配。zuAl6
(十)2×SSC溶液ut
用分析天平称取氯化钠17.53克，柠檬酸钠8.82克溶于蒸馏水中，加蒸馏水至1000毫升。#?58:
（十一）3％琼脂：0:](
取琼脂粉3克，加入双蒸水到100毫升，搅匀，高压消毒后(15磅20分钟)，冷藏备用，使用前重新加热煮沸(贮存时间不宜过长)。rE1#.
四、制备电镜标本的溶液R=
(一)2.5％戊二醛溶液"Wts
25％戊二醛 lOmlf
0.1mol／L二甲砷酸钠缓冲液iK#
装入茶色瓶中，保存于4℃冰箱备用。ec
(二)0.1mol／L二甲砷酸钠缓冲液qwaw{
二甲砷酸钠 10.70g t
蒸馏水 500mlF
将二甲砷酸钠置于500ml容量瓶中，先加水约400ml，震荡使其溶解，用HCl调pH到7.4，加入剩余蒸馏水，4℃冰箱保存。=
(三)包埋剂VWbYOB
环氧树脂Epon812 56.30g zeGU
DDSA(十二烷基琥珀酸酐Dodecenyl succinicu
anhydride，DDSA) 14.60gKMjwK
MNA(甲基内次甲基邻苯二甲酸酐Methyl Nadic)w
anhydride，MNA 29.00g9gO<>
混合上述三种包埋剂成分，搅拌30分钟使其充分混匀。再加加速剂2,4,6一三(二甲氨基甲基)苯酚(2，4，6-tridimethyl aminomethylphenol，DMP-30)1.5ml，继续搅拌30分钟，置于干燥罐中(室温)备用。_VbOr,
(四)2％单宁酸(LwZ
单宁酸 2g+T
双蒸水 100mluBK^
溶解后过滤装茶色瓶中，4℃冰箱保存。ez
(五)高锰酸钾固定剂 Ikn$
柠檬酸三钠 60mmol/L`
氯化钾 25mmol/LS}<
氯化镁 35mmol/LO@i
高锰酸钾 125mmol/LvzM[
pH为7.4-7.8，装茶色瓶中，4℃冰箱中保存，有效期2个月左右。L(
(六)1％OsO4溶液|`}
OsO4 0.5gO2UY!
0.1mol/L二甲砷酸钠缓冲液。 50ml^r+0
OsO4一般为0.5或1克安瓶中封闭包装，配制时剥去商标，用自来水洗净，放洗涤液中泡4～12小时后用水冲洗，在安瓶上划痕，用蒸馏水洗净，投入茶色瓶中，加缓冲液，用玻璃棒在瓶中捣碎，轻轻摇动放冰箱中，48小时后完全溶解。此药蒸气对人眼、角膜、鼻腔和口腔粘膜有固定作用，用时特别小心，在通风橱内操作。$^4lD
五、显影、定影溶液oG[EZ
(一)D-72显影液 Rd_{
温水(52℃) 750ml .\
米吐尔 3gHJ4#
无水亚硫酸钠 45g%\L7Vd
对苯二酚 12g2
无水碳酸钠 67.5gzL
溴化钾 19g491M/q
水 加至1000mlAzb?_
D-72显影液为通用显影液，既能显影胶片又能用于相纸显影。:
使用原液，20℃显影时间1～2分钟可得高反差。T
加水1:2稀释后使用可得较低反差。1:1稀释使用。20℃时显影时间3～4分钟可得正常反差。$
(二)SB-1停显液配方k]
水 1000ml{
28％醋酸 48mlU
停显时间lO秒左右。@p_x
(三)F-5酸性坚膜定影液#,n
水 750ml:ttHI
硫代硫酸钠 240gB'
无水亚硫酸钠 15g}
28％醋酸 48mlS&e<
硼酸 7.5gc7l
钾矾 15gr7^f
水 1000ml J9
定影时，药液温度应保持在18~20℃定影时间10~15分钟。QM
配药原则/Aj?
配制时先取容量3/4的清水，水温50℃左右，按配方的顺序，把称好的药逐一加入，只有前一药品溶解后，方可放入第二种药品，并继续溶解下去，最后将清水加至全量。m
配完后要经12小时，待各种药品充分作用后才能使用。@CC$
上述各种溶液配制好后，匀应贴瓶签，注明名称，浓度及配制日期，并按规定方法保存，用前检查有无变质或污染现象后，方可使用。