(二)分离液
1、肌细胞分离液
配方一 马克凯郎(Maccallum)液
取1份浓硝酸、2份甘油、3份水,混合后就得到马克凯郎液。
把新鲜的肌肉组织小块(横纹肌、心肌和平滑肌)投入这种溶液里浸渍,分离时间需1~3日。这种溶液尤其适于分离横纹肌核心肌细胞。
配方二 氢氧化钾溶液
取35克氢氧化钾,放在100毫升蒸馏水中,加热,使它完全溶解后,在室温下冷却。
把新鲜的肌肉组织块投入氢氧化钾溶液中,浸泡15~30分钟后,肌细胞便可分离。
2、上皮细胞分离液
配方一 福尔马林—氯化钾溶液
称取58.44克氯化钠,用蒸馏水溶解,再稀释到1000毫升,加入2毫升福尔马林。
这种溶液是很好的上皮细胞分离液,分离很迅速,而且能保护纤细的上皮细胞纤毛。小肠和气管的上皮组织小块,放在此溶液里2小时即可分离,口腔和皮肤上皮组织小块的细胞分离一般需3日左右。
配方二 水和氯醛溶液
称取5克水和氯醛,用蒸馏水溶解,再稀释到100毫升,就得到5%水合氯醛溶液。
从洗净的动物胃、肠和口腔内壁上取下上皮组织一小块,投入以上溶液中,浸泡24~48小时。
3、神经细胞分离液
配方一 可以用上皮细胞分离液配方一福尔马林—氯化钠溶液来分离神经细胞(见2)。
配方二 硼酸生理盐水溶液
在生理盐水溶液内加入一些硼酸,搅拌到不再溶解时为止,使成为饱和溶液。
把脊椎灰质和脑皮质部位的神经组织一小块投入这种溶液中分离。
4、植物茎细胞分离液
杰弗里氏(Jeffrey’s)液
取等量的10%铬酸溶液和10%硝酸溶液混合,成铬酸—硝酸溶液。
这种溶液用来分离木本植物茎部的导管、管胞、筛管、伴胞和韧皮纤维等。把材料切成小块放在水里,加热煮沸,冷却后再加热煮沸。这样重复几次,到材料全部沉于水底后,投入分离液内,分离时间是24~48小时。
5、植物根尖细胞分离液
配方一 盐酸—酒精溶液
在1份95%酒精中慢慢的加入1份浓盐酸,即成盐酸—酒精溶液,装瓶密闭保存。
把植物根尖部位截下一小段,投入以上溶液中分离。
配方二 4%盐酸溶液
配制4%盐酸溶液。
截下植物根尖部位,投入盛有4%盐酸溶液的小烧杯内,在60摄氏度温水中隔水温热1~2分钟,使根尖软而不酥,这时分离效果最好。
6、植物纤维分离液
取10克氢氧化钠(或氢氧化钾),溶解在90毫升水里,制成10%氢氧化钠(或氢氧化钾)溶液,放在瓶里密闭保存。
把植物茎纵切成细条,剪成小段后,投入分离液内。
7、植物细胞质壁分离液
配方一 30%蔗糖溶液
取30克蔗糖,溶解在70毫升蒸馏水里,装瓶备用。
配方二 5%氯化钠溶液
取5克食盐,溶解在95毫升蒸馏水里,装瓶备用。
配方三 5%硝酸钾溶液
取5克硝酸钾,溶解在95毫升蒸馏水里,装瓶备用。
(三)生理盐水
配方一 各种动物需用的生理盐水
哺乳类 需用生理盐水浓度是0.9%。称取0.9克氯化钠,溶解在少量蒸馏水中,稀释到100毫升。
鸟类 需用的生理盐水浓度是0.75%。称取0.75克氯化钠,溶解后用蒸馏水稀释到100毫升。
两栖类 需用的生理盐水浓度是0.65%。称取0.65克氯化钠,溶解后用蒸馏水稀释到100毫升。
配方二 任氏(Ringer’s)生理盐水
氯化钠 6.5克 碳酸氢钠 0.2克
氯化钾 0.14克 磷酸二氢钠 0.01克
氯化钙 0.12克
先把氯化钠、氯化钾、碳酸氢钠、磷酸二氢钠分别溶解在少量蒸馏水中,混合后用蒸馏水稀释到980毫升。然后取氯化钙溶解在20毫升蒸馏水中,把氯化钙溶液逐滴加入到上述溶液内,边滴、边搅拌,以免产生不溶解的磷酸钙沉淀。
此溶液用于变温动物,尤其常用于两栖类。
配方三 乐氏(Locke’s)生理盐水
氯化钠 9.0克 碳酸氢钠 0.1~0.3克
氯化钾 0.42克 氯化钙 0.24克
把氯化钠、氯化钾、碳酸氢钠分别用少量蒸馏水溶解,混合后加蒸馏水到980毫升。把氯化钙溶解在20毫升蒸馏水里,逐滴加入上述溶液中。
以上溶液用于恒温动物,尤其常用于哺乳类。
四)培养液
1、人造海水
配方一
氯化钠( ) 24.72克
氯化钾( ) 0.67克
氯化钙( ) 1.36克
氯化镁( ) 4.66克
硫酸镁( ) 6.29克
碳酸氢钠( ) 0.18克
蒸馏水 加到1升
把上述各种盐溶解在少量蒸馏水中,再加入碳酸氢钠,最后用蒸馏水稀释到1000毫升。
配方二
氯化钠 45.0克 硫酸镁 0.1克
氯化镁 5.0克 氯化铁(1%溶液) 1滴
先把硫酸镁、磷酸一氢钾、氯化铁用少量蒸馏水溶解,加蒸馏水到980毫升。随后取硝酸钙溶解在20毫升蒸馏水里,把此溶液逐滴加到上述溶液内,装瓶保存。
配方二 克诺普氏(Knop’s)溶液
硝酸钾 1克 硫酸镁 1克
磷酸二氢钾 1克 硝酸钙 3克
先把硝酸钾、硫酸镁、磷酸二氢钾用少量蒸馏水溶解,加蒸馏水到980毫升。随后取硝酸钙,用20毫升蒸馏水溶解,加入到上述溶液内。溶液灰形成白色沉淀,在使用是必须摇动。
在以上溶液中加入蔗糖溶液(1~4%),能刺激某些藻类形成游动孢子。该液用于培养绿藻。
3、植物无土培养液
配方 霍格伦德(Hoagland)和斯纳德(Snyder)液
硝酸钙 0.821克 硝酸钾 0.506克
磷酸二氢钾 0.136克 硫酸镁 0.120克
酒石酸铁 0.005克
把上述盐类溶解在少量蒸馏水里,然后稀释到1000毫升。
(五)培养基
1、细菌培养基
配方一 牛肉膏琼脂培养基
牛肉膏 0.3克 蛋白胨 1.0克
氯化钠 0.5克 琼脂 1.5克
水 1000毫升
在烧杯内加水100毫升,放入牛肉膏、蛋白胨和氯化钠,用蜡笔在烧杯外作上记号后,放在火上加热。待烧杯内各组分溶解后,加入琼脂,不断搅拌以免粘底。等琼脂完全溶解后补足失水,用10%盐酸或10%的氢氧化钠调整pH值到7.2~7.6,分装在各个试管里,加棉花塞,用高压蒸汽灭菌30分钟。
配方二 马铃薯培养基
取新鲜牛心(除去脂肪和血管)250克,用刀细细剁成肉末后,加入500毫升蒸馏水和5克蛋白胨。在烧杯上做好记号,煮沸,转用文火炖2小时。过滤,滤出的肉末干燥处理,滤液pH值调到7.5左右。每支试管内加入10毫升肉汤和少量碎末状的干牛心,灭菌,备用。
配方四 根瘤菌培养基
葡萄糖 10克 磷酸氢二钾 0.5克
碳酸钙 3克 硫酸镁( ) 0.2克
酵母粉 0.4克 琼脂 20克
水 1000毫升 1%结晶紫溶液 1毫升
先把琼脂加水煮沸溶解,然后分别加入其他组分,搅拌使溶解后,分装,灭菌,备用。
2、放线菌培养基
配方一 淀粉琼脂培养基(高氏培养基)
可溶性淀粉 2克 硝酸钾 0.1克
磷酸氢二钾 0.05克 氯化钠 0.05克
硫酸镁 0.05克 硫酸亚铁 0.001克
琼脂 2克 水 1000毫升
先把淀粉放在烧杯里,用5毫升水调成糊状后,倒入95毫升水,搅匀后加入其他药品,使它溶解。在烧杯外做好记号,加热到煮沸时加入琼脂,不停搅拌,待琼脂完全溶解后,补足失水。调整pH值到7.2~7.4,分装后灭菌,备用。
配方二 面粉琼脂培养基
面粉 60克 琼脂 20克
水 1000毫升
把面粉用水调成糊状,加水到500毫升,放在文火上煮30分钟。另取500毫升水,放入琼脂,加热煮沸到溶解后,把两液调匀,补充水分,调整pH值到7.4,分装,灭菌,备用。
3、真菌培养基
配方一 萨市(Sabouraud’s)培养基
蛋白胨 10克 琼脂 20克
麦芽糖 40克 水 1000毫升
先把蛋白胨、琼脂加水后,加热,不断搅拌,待琼脂溶解后,加入40克麦芽糖(或葡萄糖),搅拌,使它溶解,然后分装,灭菌,备用。
本培养菌是培养许多种类真菌所常用的。
配方二 马铃薯糖琼脂培养基
把马铃薯洗净去皮,取200克切成小块,加水1000毫升,煮沸半小时后,补足水分。在滤液中加入10克琼脂,煮沸溶解后加糖20克(用于培养霉菌的加入蔗糖,用于培养酵母菌的加入葡萄糖),补足水分,分装,灭菌,备用。
把这培养基的pH值调到7.2~7.4,配方中的糖,如用葡萄糖还可用来培养放线菌和芽孢杆菌。
配方三 黄豆芽汁培养基
黄豆芽 100克 琼脂 15克
葡萄糖 20克 水 1000毫升
洗净黄豆芽,加水煮沸30分钟。用纱布过滤,滤液中加入琼脂,加热溶解后放入糖,搅拌使它溶解,补足水分到1000毫升,分装,灭菌,备用。
把这培养基的pH值调到7.2~7.4,可用来培养细菌和放线菌。
配方四 豌豆琼脂培养基
豌豆 80粒 琼脂 5克
水 200毫升
取80粒干豌豆加水,煮沸1小时,用纱布过滤后,在滤液中加入琼脂,煮沸到溶解,分装,灭菌,备用
4、食用菌菌种培养基
配方一 马铃薯—蔗糖--琼脂培养基
20%马铃薯煮汁 1000毫升
蔗糖 20克 琼脂 18克
把马铃薯洗净去皮后,切成小块。称取马铃薯小块200克,加水1000毫升,煮沸20分钟后,过滤。在滤汁中补足水分到1000毫升,即成20%马铃薯煮汁。在马铃薯煮汁中加入琼脂和蔗糖,煮沸,使它溶解后,补足水分,分装,灭菌,备用。使用该培养基对pH值要求不严格,可以不测定。
配方二 综合马铃薯培养基
20%马铃薯煮汁 1000毫升
磷酸二氢钾 3克 硫酸镁 1.5克
葡萄糖 20克 维生素 10毫克
琼脂 18克
先配制20%马铃薯煮汁,方法同上。在煮汁中加入上述各种组分,加热溶解后补足水分,调整pH值到6。分装,灭菌,备用。
该培养基用于培养和保存灵芝、平菇、香菇等食用菌菌种。